ImmunoChemistry：FLIVO抑制劑和示蹤劑

       關于細胞凋亡的檢測產品，市面上屢見不鮮，但是大部分都是針對體外（in vitro）細胞的，活體(in vivo)細胞的凋亡檢測卻不多見。ImmunoChemistry Technologies（簡稱“ICT”）的FLIVO系列產品，能夠用于細胞凋亡活體檢測。

       FLIVO(FLuorescence in vIVO)探針是細胞滲透性、無毒性的天冬氨酸蛋白酶(Caspases)熒光抑制劑，含有纈氨酸－丙氨酸－天冬氨酸(VAD)氨基酸序列，該序列是活性Caspase的靶點,夾在熒光標記和氟甲基酮(FMK)之間。靜脈注射后，FLIVO通過體循環，在細胞中不斷擴散。如果細胞內存在活性Caspase，FLIVO將與Caspase上的半胱氨酸形成不可逆的共價鍵。因此只要細胞膜完好，結合的FLIVO探針就會留在細胞內，從而被標記上熒光，未結合的FLIVO則在動物的體循環中被清除，動物體內剩下的信號就是對caspase活性的直接測定。所以FLIVO可以用于檢測活體動物體內Caspase介導的細胞凋亡、焦亡。FLIVO非常敏感，自然發生的低水平細胞凋亡也會被檢測到。  

       ICT可提供FLIVO試劑盒和示蹤劑,包含的FLIVO探針由熒光基團、VAD序列和氟甲基酮(FMK)組成夾心結構，熒光基團用來檢測熒光，VAD序列是活性caspase靶點，FMK有助于與活性caspase形成共價鍵。  

       FLIVO體內（in vivo）天冬氨酸蛋白酶(Caspases)活性檢測試劑盒

       利用FAM-FLIVO監測細胞死亡，健康神經元和凋亡神經元之間有明顯的區別。在對糖尿病的活體動物大腦研究中，對照大鼠(左)和8周STZ糖尿病大鼠(右)的caspase活性來評估神經退行性變。在大鼠死亡前30分鐘靜脈注射FAM-FLIVO(貨號#981)，直接標記caspase陽性凋亡神經元。死亡后，制備20um冰凍切片的導水管周圍灰質(PAG)，用紅色熒光Nissl反染色，以識別所有神經元。瀕死的凋亡神經元(左)顯示FAM-FLIVO(黃/綠色)和Nissl(紅色)雙重染色。在該模型中，糖尿病動物導水管周圍灰質中caspase活性水平高于對照組動物。 

       FLIVO示蹤劑

       * 僅供科研使用，不得用于醫療. 

       在小鼠腦內接種活金黃色葡萄球菌后誘發腦膿腫。動物在感染后17小時靜脈注射NIR-FLIVO 690示蹤劑(貨號#9112)或NIR-FLIVO 690游離染料對照劑(貨號#9113)，然后在1小時后使用IVIS?Spectrum?從離體大腦組織中獲得信號。在注射NIR-FLIVO 690示蹤劑(右圖)后，強烈的caspase活性與腦膿腫相關，而在注射NIR-FLIVO 690游離染料對照劑(左圖)的動物中檢測到極少的信號。 

       使用CRi Maestro?成像系統，使用NIR-FLIVO 747示蹤劑(貨號#9114)對小鼠腫瘤模型中的凋亡組織進行體內成像。NIR-FLIVO 747示蹤劑用于無創監測一種實驗性抗癌治療的療效和時間動力學。在接受安慰劑或實驗治療后，陰性對照小鼠(左圖)和實驗治療小鼠(右圖)靜脈注射NIR-FLIVO 747示蹤劑，并在不同時間點使用CRi Maestro?成像系統進行無創成像。實驗組被試的凋亡腫瘤組織呈亮藍色熒光，表明實驗治療有凋亡效應。  

       FLIVO探針的活體使用對藥物測定研究很有價值，因為通過活體動物的熒光成像可測定藥物反應性所引起的凋亡水平升高或降低。凋亡水平的升高使得粘附的探針更多，因此熒光強度增加。此外，活體技術避免了從動物上取出細胞和組織的需要，這會進一步誘導凋亡。    

       美國ICT除了可提供全面的細胞活性檢測相關試劑，包括凋亡、 caspase、 自噬、細胞毒性、壞死等相關檢測，還可以同時提供高質量高靈敏度的 ELISA以及相關試劑，包括包被液、封閉液、 沖洗液、 底物、 終止液、 板子等等。    

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